¿Qué es una prueba de zona de inhibición?
Una prueba de zona de inhibición (Zone of inhibition, ZOI) es una manera rápida de determinar la eficacia antibacteriana de un producto o superficie tratados. Este método, conocido originalmente como prueba de Kirby-Bauer, fue evolucionando desde la investigación antibiótica en el sector farmacéutico y, más adelante, fue adoptado para comprobar las propiedades antibacterianas de los polímeros y textiles.
¿Cómo se hace una prueba de zona de inhibición?
En una prueba de zona de inhibición clásica, se toma una placa de Petri que tenga un agar nutritivo y se llena con un cultivo de bacterias. Se recorta un trozo (de 2,5 cm x 2,5 cm aprox.) de muestra de algún producto tratado con un agente antimicrobiano y se introduce en el agar nutritivo. A continuación, se incuba la placa de Petri durante 18 a 24 horas a 36 °C, que son las condiciones idóneas para la proliferación de bacterias.
Tras el período de incubación, las bacterias del agar nutritivo deberían estar bien establecidas y visibles en forma de una especie de césped amarillo. En las partes de la prueba en las que el agente antimicrobiano pueda migrar al medio nutritivo alrededor de la muestra se podrá ver una zona despejada.
El tamaño de esta zona es indicativo de la fuerza del agente antimicrobiano específico que se encuentra en la muestra tratada.
Fotografía superior (izq.): Se toma una placa de Petri que contenga un agar nutritivo y se llena de las bacterias de la prueba. Fotografía superior (dcha.): Se coloca con cuidado un trozo de muestra de prueba en el agar nutritivo con las bacterias. A continuación, se incuba la placa durante 18-24 horas en un entorno de humedad relativa superior al 90 %.
¿Qué limitaciones tiene la prueba de la zona de inhibición?
Aunque la prueba de la zona de inhibición muestra resultados visibles y convincentes, también presenta algunas limitaciones relacionadas con el tamaño de la zona.
- Una zona de inhibición amplia no indica necesariamente que el producto esté bien protegido: una zona de inhibición amplia puede ser señal de un agente antimicrobiano lixiviante por el cual el ingrediente activo abandona el producto tratado y se dispersa en el entorno circundante. Esto puede deberse, en parte, a una falta de compatibilidad entre el agente antimicrobiano y el producto, lo que produce una disminución del rendimiento antimicrobiano. Además, los antimicrobianos lixiviantes pueden exponer tanto al usuario como al ambiente a cantidades innecesarias de biocida.
- Una falta de zona visual no significa que el agente antimicrobiano no sea efectivo: la prueba de zona de inhibición necesita que el agente antimicrobiano migre al agar nutritivo. Si un antimicrobiano no es compatible con el agar nutritivo, no migrará y, por tanto, no creará una zona visual de inhibición. Aunque el agente antimicrobiano/a proteja el producto de forma brillante, una falta de zona visual, según los estándares de la prueba de zona de inhibición, podría conducir erróneamente a un evaluador sin experiencia a pensar que no es efectivo. Entre los antimicrobianos que no son compatibles con el agar nutritivo que se utiliza en la prueba de zona de inhibición se encuentran los antimicrobianos a base de plata y los antimicrobiano organometálicos de zinc.
Fotografía superior (izq. y dcha.): Trozo de prueba tras la incubación. La zona despejada, pequeña pero bien establecida, que se encuentra alrededor de la muestra en la imagen izquierda es un indicativo suficiente de la eficacia antibacteriana. La zona amplia y difusa alrededor de la muestra en la imagen derecha puede que indique más potencia antibacteriana, pero también puede significar que el antimicrobiano no es muy compatible con la muestra y tiende a migrar fuera de ella.
En químicos peligrosos, como las isotiazolinonas, debe considerarse si esta tendencia a la migración es deseable.
¿Cómo emplea Microban la prueba de la zona de inhibición?
Microban utiliza la prueba de zona de inhibición para calcular rápidamente el rendimiento de agentes antimicrobianos específicos. Una zona de inhibición muy amplia no siempre se interpreta como una protección antimicrobiana superior para el producto, sino que más bien puede ser indicativa de inestabilidad y tendencia a migrar.
Normalmente, si hay una zona pequeña, limpia y despejada alrededor del producto, esta se considera indicativa de efectividad, longevidad y estabilidad antimicrobianas.
Aunque se utiliza muy a menudo en laboratorios de todo el mundo, se ha cuestionado la eficacia de la prueba de zona de inhibición hasta la saciedad. Actualmente, este método de prueba suele sustituirse por otros métodos cuantitativos más precisos, como la ISO 22196 o el JIS Z2801.
Servicios de análisis microbiológico Microban: ¿En qué podemos ayudarle?
Microban ofrece una serie de análisis y servicios de asistencia técnica. Nuestros laboratorios de microbiología llevan a cabo un sinfín de pruebas cualitativas y cuantitativas de acuerdo con estándares internacionales y de la industria reconocidos, tales como AATCC, ASTM, EPA, ISO, JIS y FZ/T.
En nuestro laboratorio de análisis de bacterias, se evalúan muestras antimicrobianas para ver su rendimiento frente a bacterias grampositivas y gramnegativas y determinar su alcance. Nuestra cartera de pruebas incluye pruebas convencionales, como la de la zona de inhibición, la monitorización ambiental (p. ej.: recuento en placa de aerobios) y and estudios de concentración inhibitoria mínima (CIM) además de estudios de neutralización (ASTM E1054).
Los laboratorios de análisis microbiológicos de Microban cuentan con las certificaciones ISO 9001:2008 e ISO 17025 para una amplia gama de pruebas antimicrobianas. En nuestros laboratorios de pruebas de última generación con niveles de bioseguridad 2, nuestros microbiólogos experimentados llevan a cabo análisis bacteriológicos y micológicos de manera habitual.
Estos laboratorios tienen la capacidad de realizar más de 30 000 pruebas bacterianas y fúngicas por año usando métodos de prueba estándares del sector diseñados para una amplia variedad de sustratos de productos y tecnologías antimicrobianas.
Si desea obtener más información sobre nuestras pruebas y servicios, póngase en contacto con nuestro equipo hoy mismo.
NOTA: Este artículo también puede ayudar a entender las diferencias entre el tamaño de la zona en la prueba TM90 de la AATCC, ya que es similar a la Kirby-Bauer con algunas modificaciones.
